Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy.
2 Laboratoire Epigenetique et Cancer
3 Department of Pharmacology
4 Immunobiologie des Cellules Dendritiques
5 FEMTO-ST - Franche-Comté Électronique Mécanique, Thermique et Optique - Sciences et Technologies (UMR 6174)
6 Telethon Institute for Genetics and Medicine
7 Medical Genetics
8 Department of Molecular and Human Genetics
9 Jan and Dan Duncan Neurological Research Institute
10 Signalisation et physiopathologie des cellules épithéliales
11 DIMNP - Dynamique des interactions membranaires normales et pathologiques
12 IBGC - Institut de biochimie et génétique cellulaires
13 IRIM - Institut de Recherche en Infectiologie de Montpellier
14 Celullar and Molecular Medicine
15 E2SNC / ESTROGENES - Estrogènes, Expression génique et pathologies du Système Nerveux Central - UFC
16 Infection bactérienne, inflammation, et carcinogenèse digestive
17 UNS - Université Nice Sophia Antipolis (1965 - 2019)
18 Department of Computer Science [Tsukuba]
19 Gunma University
20 Cell Biology, Physiology and Immunology
21 Dulbecco Telethon Institute/Department of Biology
22 Department of Chemistry and HKU-CAS Joint Laboratory
23 LaBRI - Laboratoire Bordelais de Recherche en Informatique
24 Learning Sciences Lab
25 University of California
26 COSS - Chemistry, Oncogenesis, Stress and Signaling
27 Emory University School of Medicine
28 U753 - Cytokines et Immunologie des Tumeurs Humaines
29 Biology
30 Oxford University
31 University of Strathclyde [Glasgow]
32 UIBC - Interactions Bactéries-Cellules
33 Department of Experimental Medicine and Oncology
34 IGF - Institut de Génomique Fonctionnelle
35 CNV
36 Section of Haemato-oncology
37 IMN - Institut des Maladies Neurodégénératives [Bordeaux]
38 Brunel University London [Uxbridge]
39 The University of New Mexico [Albuquerque]
40 Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas
41 Biochemistry and Molecular Biology
42 Dpt. of Cancer & Cell Biology
43 IJM (UMR_7592) - Institut Jacques Monod
44 Virologie humaine
45 IIB-INTECH - Instituto de Investigaciones Biotecnológicas [San Martín]
46 I2BC - Institut de Biologie Intégrative de la Cellule
47 HERPES - Virulence et Latence des Herpesvirus
48 MRC Centre for Developmental Neurobiology
49 UniBs - Università degli Studi di Brescia = University of Brescia
50 I2V - Immunité infection vaccination
51 Dept of City and Regional Planning
52 Biochemistry and Molecular Biology
53 Montreal Neurological Institute and Hospital
54 Department of Developmental Biology and Neurosciences
55 LBD - Laboratoire de Biologie du Développement [IBPS]
56 LBD-E03 - C.elegans Hérédité et Développement = C.elegans heredity and development
57 LBD-E03 - C.elegans Hérédité et Développement = C.elegans heredity and development
58 Faculty of Medicine
59 IRCM - U896 Inserm - UM1 - Institut de recherche en cancérologie de Montpellier
60 ICT - Immunologie et chimie thérapeutiques
61 UNISTRA - Université de Strasbourg
62 Département Digestif
63 C3M - Centre méditerranéen de médecine moléculaire
64 AIST - National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
65 Department of Oncology
66 School of Biochemistry and Immunology
67 Department of Cellular and Structural Biology, University of Texas Health Science Center
68 Laboratoire de Pathologie Clinique et Expérimentale
69 Department of Biochemistry
70 Danish Cancer Society = Kræftens Bekæmpelse
71 IBCP - Institut de biologie et chimie des protéines [Lyon]
72 MHH - Department of Gastroenterology, Hepatology and Endocrinology
73 Cancer Research UK London Research Institute
74 Cell Biology, section Radiation & Stress Cell Biology
75 Department of Molecular Genetics
76 Institute of Immunology
77 Institute for Immunology
78 Department of Neuroscience
79 CGPhiMC - Centre de génétique et de physiologie moléculaire et cellulaire
80 CRC (UMR_S 872) - Centre de Recherche des Cordeliers
81 U848 - Apoptose, cancer et immunité
82 Plateforme de métabolomique
83 Pôle de biologie
84 UPD5 Médecine - Université Paris Descartes - Faculté de Médecine
85 Department of Molecular Neuroscience
86 CERN - European Organization for Nuclear Research
87 CVIT - Center for Visual Information Technology [Hyderabad]
88 MIT - Massachusetts Institute of Technology
89 Department of Biochemistry and Molecular Biology
90 Centre for Cancer Biology
91 INRA - Institut National de la Recherche Agronomique
92 M2iSH - Microbes, Intestin, Inflammation et Susceptibilité de l'Hôte
93 Facultad de Medicina
94 IGMM - Institut de Génétique Moléculaire de Montpellier
95 SeRAIC - Signalisation et Réponses aux Agents Infectieux et Chimiques
96 OTOFAJ - Autophagie et Développement
97 NCKU - National Cheng Kung University
98 Microenvironnement et Physiopathologie de la Differenciation
99 HHMI - Howard Hughes Medical Institute [Chevy Chase]
100 University of Texas Southwestern Medical Center
101 School of Information science and engineering
102 School of computer and information
103 National Neuroscience Institute
104 NUS - National University of Singapore
105 IMFS - Institut de Mécanique des Fluides et des Solides
106 INRS-AFSB - Armand-Frappier Santé Biotechnologie Research Centre
107 Central China Normal University [Wuhan, China]
108 CIBMTR - Center for International Blood and Marrow Transplant Research
109 Departamento de Bioquímica y Biología Molecular
110 LIST (CEA) - Laboratoire d'Intégration des Systèmes et des Technologies
111 Equipe labellisée Ligue contre le Cancer
112 JHU - Johns Hopkins University [Baltimore]
113 Universität Graz = University of Graz
114 Department of Pediatrics
115 Department of Experimental Pharmacology
116 Drug Research and Evaluation
117 Albert Einstein College of Medicine [New York]
118 Institute of Molecular Biology and Biotechnology
119 UMR ISEM - Institut des Sciences de l'Evolution de Montpellier
120 IBDC - Institut de signalisation, biologie du développement et cancer - Institute of Developmental Biology and Cancer
121 Departments of Neurology
122 Vanderbilt University [Nashville]
123 Departments of Pharmacology
124 Department of Cell Biology [New Haven]
125 Anatomic Pathology Section, Department of Human Pathology and Oncology
126 HMS - Harvard Medical School [Boston]
127 Depts of Radiation Oncology and Pathology
128 USC Neuromuscular Center, Department of Neurology
129 Department of Biology [Copenhagen]
130 Department of Cell Biology and Biophysics
131 Department of Pathology
132 UTSA - The University of Texas at San Antonio
133 Institute of Translational Medicine
134 IBC - Institute of Biochemistry
135 Department of Biology
136 GéPITOS - Génétique, physiopathologie et ingénierie du tissu osseux
137 Innovation Thérapeutique : du Fondamental au Médicament
138 Hôpital Antoine Béclère
139 Señalización Celular 4
140 Department of Molecular Biology
141 Department of Neurology Columbia University 650 West 168th Street
142 Department of Pathology and Cell Biology Columbia University 650 West 168th Street
143 Center for Motor Neuron Biology and Disease Columbia University 650 West 168th Street
144 Department of Cell Biology and Morphology
145 CC 101
146 UMCU - University Medical Center [Utrecht]
147 Service de dermatologie
148 Vieillissement, stress, inflammation
149 CAM - University of Cambridge [Cambridge, UK]
150 The Department of Chemical and Environmental Sciences
151 DMEM - Dynamique Musculaire et Métabolisme
152 IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori [Milano]
153 Neurogenetics laboratory
154 Department of Pathology
155 Experimental Tumor Pathology
156 Unit of Oculogenomics
157 ETH Zürich - Eidgenössische Technische Hochschule - Swiss Federal Institute of Technology [Zürich]
158 Eye Hospital, Department of Ophthalmology, Jules-Gonin ,
159 Division of regenerative Medicine
160 ICB - Instituto de Ciencias Biomédicas
161 Department of pathology
162 Department of Endocrine and Oncology Surgery
163 Department of Surgery, Bankstown Hospital and South Western Sydney Clinical School
164 MRC Human Immunology Unit
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167 Sidney Kimmel Cancer Center
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170 Cancer Institute
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172 Department of Experimental and Diagnostic Medicine and Interdisciplinary Center for Study of inflammation and ER-GenTech
173 Laboratory of Molecular and Cellular Parasitology - Department of Microbiology
174 CMPG - Center of Microbial and Plant Genetics
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176 IMPG - Instituto de Microbiologia Paulo de Góes [Rio de Janeiro]
177 Immunité Innée et Signalisation
178 Istituto CSS Mendel [Rome, Italy]
179 Department of Medical and Surgical Pediatrics
180 Department of Intensive care Medicine
181 Department of Cell Biology
182 Department for Molecular Biomedical Research
183 Department of Pediatrics
184 Department of Chemistry
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186 Sch Mat Sci & Engn
187 IRI - Institut de Recherche Interdisciplinaire [Villeneuve d'Ascq]
188 Nankai University
189 Division of Endocrinology and Diabetes
190 Department of Pharmacology and Cancer Biology
191 Department of Experimental Oncology and Molecular Medicine
192 IMP - Institute of Modern Physics [Lanzhou]
193 Key Laboratory of Heavy Ion Radiation Medicine of Gansu Province
194 ICT - Institute of Computing Technology [Beijing]
195 ESRF - European Synchrotron Radiation Facility
196 Plant Physiology Laboratory
197 Division of Biopharmaceutics
198 IMM - The Institute of Environmental Medicine [Stockholm]
199 IBBMC - Institut de biochimie et biophysique moléculaire et cellulaire
200 Center for Brain Repair and Rehabilitation
201 department of genetics - Institute of biochemistry and biophysics
202 Departament de Bioquímica i Biologia Molecular
203 Chaperones Research Group
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Résumé
In 2008 we published the first set of guidelines for standardizing research in autophagy. Since then, research on this topic has continued to accelerate, and many new scientists have entered the field. Our knowledge base and relevant new technologies have also been expanding. Accordingly, it is important to update these guidelines for monitoring autophagy in different organisms. Various reviews have described the range of assays that have been used for this purpose. Nevertheless, there continues to be confusion regarding acceptable methods to measure autophagy, especially in multicellular eukaryotes. A key point that needs to be emphasized is that there is a difference between measurements that monitor the numbers or volume of autophagic elements (e.g., autophagosomes or autolysosomes) at any stage of the autophagic process vs. those that measure flux through the autophagy pathway (i.e., the complete process); thus, a block in macroautophagy that results in autophagosome accumulation needs to be differentiated from stimuli that result in increased autophagic activity, defined as increased autophagy induction coupled with increased delivery to, and degradation within, lysosomes (in most higher eukaryotes and some protists such as Dictyostelium) or the vacuole (in plants and fungi). In other words, it is especially important that investigators new to the field understand that the appearance of more autophagosomes does not necessarily equate with more autophagy. In fact, in many cases, autophagosomes accumulate because of a block in trafficking to lysosomes without a concomitant change in autophagosome biogenesis, whereas an increase in autolysosomes may reflect a reduction in degradative activity. Here, we present a set of guidelines for the selection and interpretation of methods for use by investigators who aim to examine macroautophagy and related processes, as well as for reviewers who need to provide realistic and reasonable critiques of papers that are focused on these processes. These guidelines are not meant to be a formulaic set of rules, because the appropriate assays depend in part on the question being asked and the system being used. In addition, we emphasize that no individual assay is guaranteed to be the most appropriate one in every situation, and we strongly recommend the use of multiple assays to monitor autophagy. In these guidelines, we consider these various methods of assessing autophagy and what information can, or cannot, be obtained from them. Finally, by discussing the merits and limits of particular autophagy assays, we hope to encourage technical innovation in the field.